Интерфейс для соединения Высокоэффективного Жидкостного Хроматографа с масс-спектрометром для анализа стабильных изотопов
|
|
FINNIGAN
LС IsoLink Интерфейс для соединения Высокоэффективного Жидкостного Хроматографа с масс-спектрометром для анализа стабильных изотопов |
|
| ВЭЖХ/МС системы | IRMS | На главную | Применения | Контакты |
|
|
Интерфейс
Абсолютно новая концепция До сих пор анализ изотопных отношений 13C/12C органических образцов был ограничен газо-хроматографическим разделением с последующим сжиганием (GC/MS, irm-GC/MS) или интегральным сжиганием образцов в элементном анализаторе. Поскольку абсолютное большинство важных для биохимии и фармацевтики соединений являются нелетучими или слишком термолабильными для использования газовой хроматографии, определение изотопных отношений 13C/12C этих компонентов в реальных аналитических применениях, обычно в сложной матрице, было невозможно или сопряжено с черейзвычайно сложной и многостадийной методикой. Finnigan LC IsoLink преодолевает барьер, который до сих пор препятствовал успешному изотопному мониторингу соединений, разделяемых высокоэффективной жидкостной хроматографией, позволяя проводить количественную, свободную от фракционирования окислительную конверсию жидкой фазы в CO2. В Finnigan LC IsoLink жидкая фаза не удаляется из образца до окисления, а образец окисляется в водном растворе и только потом CO2 извлекается из жидкой фазы для изотопного анализа. Окислительный реагент состоит из двух растворов: собственно окислительного агента и катализатора. Оба закачиваются раздельно и добавляются к мобильной фазе ВЭЖХ. Все индивидуальные органические соединения, элюируемые из ВЭЖХ колонки, количественно окисляются до CO2 в этой смеси во время прохождения через нагреваемый реактор. В модуле дегазации CO2 извлекается из жидкой фазы и переносится в поток гелия. Индивидуальные пики CO2 в He последовательно осушаются в модуле осушки (Nafion™) и затем подаются в изотопный масс-спектрометр через интерфейс с открытым сбросом. Поскольку жидкая фаза вообще не испаряется, неорганические буфферы, например фосфатные, никак не влияют на работу интерфейса и не могут аккумулироваться где-либо в системе. Это сильно отличает Finnigan LC IsoLink от любых других ВЭЖХ/МС интерфейсов и делает его абсолютно свободным от какого-либо обслуживания. |
Cахара на катионно-обменной колонке |
Коротко-цепочечные пептиды и аминокислоты на эндкипированной обращенно-фазной колонке C18 | |
Сахара являются одними из наиболее широкораспространенных молекул в живой
природе. Они служат источником энергии, основой ДНК и РНК, транспортом биологически-активных соединений и в качестве строительного материала
структуры растений. Сахара могут нести информацию о своем происхождении и технологических процессах. Изотопно-меченные сахара
могут поведать о путях их ферментирования и использования |
Aминокислоты и пептиды - основные элементы строения белков. Их структура и метаболизм вызывают основной интерес в медицине и биологии.
Природные изотопные различия или специально введенные изотопные метки могут быть использованы для выяснения путей
их превращений. | |
Лекарственные средства на обращенно-фазной эндкиппированной колонке C18 |
Поскольку фармацевтические средства производятся в различных местах с различными формулами и отличаются по ценам, представляется важным как для производителей, так и для покупателей иметь возможность различать места их происхождения. Aспирин® и парацетамол - типичные представители лекарств большой распространенности, характеризующихся широким разбросом мест происхождения и цен. |  |
Аналитические характеристики Точность, воспроизводимость и чувствительность
Правильность (точность) и воспроизводимость проверялись с использованием стандартов, сертифицированных по изотопным отношениям.
Величина d13C 369 нг бензойной кислоты (254 нг углерода) анализировалась повторным петлевым вводом
и было показано, что правильность находится в пределах 0.08 ‰, а воспроизводимость 0.11 ‰. Эти значения сравнимы с правильностью и
воспроизводимостью при интегральном анализе в системе элементный анализатор - изотопный масс-спектрометр, но при этом используется в 100 раз
меньше образца. Линейность оценивалась по различному количеству ввода сахарозы. Образец вводился в количествах от 3.25 мкг дo 325 нг и
величины изотопных отношений оказывались независимыми от количества введенного образца в этом диапазоне. Чувствительность интегированной
системы - высокоэффективный жидкостный хроматограф - изотопный масс-спектрометр позволяет проводить определение отношения
13C/12C на образцах в количестве 50 нг. Минимальное определяемое количество в режиме ВЭЖХ зависит от уровня фона,
создаваемого ВЭЖХ колонкой
Спецификация После окончания процедуры монтажа и пуска в эксплуатацию Finnigan LC IsoLink будет продемонстрирована внешняя воспроизводимость < 0.3 ‰ для d 13C (n=5) при прямом петлевом вводе. Для этого потребуется наличие ВЭЖХ насоса. |
| Основные характеристики Finnigan LC IsoLink | Внешняя воспроизводимость на Finnigan LC IsoLink (n=5, 1s), d | ||||||||||||||||||||||||||||
| 10 импульсов стандарта (aмплитуда 3 В), d | Бензойная кислота (прямой петлевой ввод), 400 нг в 10 мкл воды |
| Воспроизводимость (1s) | Линейность | Воспроизводимость (1s) | CO2 | CO2 | ||
| CO2 | 13C | 0.06 ‰ | 0.02 ‰/nA | 3 нмоля бензойной кислоты = 21 нмоль (250 нг) C | как CO2 | < 0.3 ‰ |
| Глюкоза/Фруктоза (ВЭЖХ разделение) | 600 нг каждой | в 20 мкл воды | ||||
| 3.3 нмоль глюкозы | как CO2 | < 0.3 ‰ |
| ВЭЖХ | ГХ/МС | ВЭЖХ/МС | IRMS и ИСП/МС | На главную | Применения | Контакты |
